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《忍者龙剑传2》沿用了前作的线系章节推进关卡,以及在关卡方面采用箱庭式设计的设定。随着章节推进,隼龙将前往东京、纽约、威尼斯、莫斯科、南美洲等地,并最终前往富士山深处的冥界与邪神展开战斗。不同的章节关卡在具体的关卡设计上呈现风格的差异化,例如:纽约将出现自由女神像,以海滨城市闻名的威尼斯其水域众多,莫斯科的雪原,南美洲的热带丛林等。玩家仍需通过与神龙雕像互动以保存游戏进度,但在首次触碰神龙雕像时,可完全恢复隼龙的生命值
该作引入了数个新系统,首先在体力方面,隼龙的体力量表在周围没有敌人时自动恢复,但受到伤害的部分会以一定比例变为红色,以此表示表示无法自动恢复的体力。通过使用道具、获取蓝魂等方式,方可恢复体力量表。战斗方面,该作首次引入肢解系统,隼龙在战斗可肢解敌人,使敌人失去手脚仅能进行爬行。基于肢解系统的引入,隼龙可靠近失去手脚的敌人发动“灭杀之术”,给予敌人致命一击;而在前作中称为“灭杀”的蓄力强力攻击,在该作中变名为“绝技之术”。在功能上仍沿承两阶段蓄力,根据蓄力阶段变化使攻击威力更为强大的设定